Chemical composition and antimicrobial activity of two extract of propolis against isolates of Staphylococcus spp. and multiresistant bacterials / Composição química e atividade antimicrobiana de dois extratos de própolis contra isolados de Staphylococcus spp. e bactérias multirresistentes

There is a growing need to discover and develop alternative therapies for the treatment of mastitis caused by Staphylococcus spp. and multidrug-resistant bacterial infections. This study examined the chemical composition and antimicrobial potential of two propolis extracts (EPA and EPB) against seventy-seven isolates of Staphylococcus spp. obtained from subclinical bovine mastitis; three clinical strains of MRSA and two from clinical strains of S. aureus ATCC, identified as S. aureus ATCC 6538 and S. aureus ATCC 25923. The total phenolic content was determined by the Folin-Ciocalteau method, the total flavonoid content by the Dowd method and the phenolic profile was quantified by HPLC-DAD. The MBC values of the extracts were evaluated by broth microdilution method. The amount of total phenolic and flavonoid compounds was higher in EPA than EPB. Both extracts revealed the presence of caffeic, coumaric, cinnamic, ferulic and 3,4-dihydroxybenzoic acids, with higher concentrations of coumaric and cinnamic acids. Staphylococcus spp. isolates were susceptible to EPA (90.9%), EPB (83.1%) and oxacillin (80.5%). The oxacillin susceptible isolates were also susceptible to EPA (70.1%) and EPB (80.6%), whereas those oxacillin-resistant strains were also susceptible to EPA (40.0%) and to EPB (26.7%). MBC ranged from 34.3 to 68.7µm/mL for EPA and from 68.7 to 137.5µg/mL for EPB. Both extracts inhibited significantly (100%) the clinical strains of MRSA, S. aureus ATCC 6538 and S. aureus ATCC 25923 at the concentration of 68.7µg/mL. It is concluded that both extracts of propolis, whose main constituents are coumaric and cinnamic acids, have high antimicrobial activity against the microorganisms studied, and EPA also against oxacillin-resistant strains. These findings reinforce its potential use for the treatment of bovine mastitis.(AU)

É cada vez mais oportuna a necessidade de descobrir e desenvolver terapias alternativas para tratamento da mastite causada por Staphylococcus spp. e de infecções bacterianas multirresistentes. Este estudo examinou a composição química e o potencial antimicrobiano de dois extratos etanólicos de própolis (EPA e EPB) contra setenta e sete isolados de Staphylococcus spp. obtidos a partir de mastite bovina subclínica; três estirpes clínicas de MRSA e duas de linhagens clínicas de S. aureus ATCC, identificadas como, S. aureus ATCC 6538 e S. aureus ATCC 25923, ambas metacilina resistentes. O teor total de fenólicos foi determinado pelo método de Folin-Ciocalteau, o teor de flavonoides totais pelo método Dowd e o perfil fenólico foi quantificado por HPLC-DAD. CBM dos extratos foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo. A quantidade total de compostos fenólicos e flavonoides foi maior no EPA do que no EPB. Ambos os extratos revelaram a presença dos ácidos cafeico, cumárico, cinâmico, ferúlico e 3,4-di-hidroxibenzóico, com maiores concentrações de ácidos cumárico e cinâmico. Os isolados de Staphylococcus spp. foram sensíveis a EPA (90,9%), EPB (83,1%) e oxacilina (80,5%). Os isolados suscetíveis à oxacilina também foram suscetíveis ao EPA (70,1%) e ao EPB (80,6%), enquanto os do resistente à oxacilina foram suscetíveis ao EPA (40,0%) e ao EPB (26,7%). MBC variou de 34,3 a 68,7µm/mL para EPA e de 68,7 a 137,5µg/mL para EPB. Ambos os extratos inibiram significativamente (100%) as linhagens clínicas de MRSA, S. aureus ATCC 6538 e S. aureus ATCC 25923 na concentração de 68,7µg/mL. Conclui-se que os extratos etanólicos da própolis, cujos principais constituintes são os ácidos cumário e cinâmico, possuem atividade antimicrobiana contra os micro-organismos estudados, e o EPA também contra as cepas resistentes à oxacilina. Estes achados reforçam seu potencial uso para o tratamento da mastite bovina.(AU)

Antimicrobial susceptibility profile of historical and recent Brazilian pig isolates of Pasteurella multocida / Perfil de suscetibilidade a antimicrobianos de isolados históricos e contemporâneos de Pasteurella multocida de suínos no Brasil

Pasteurella (P.) multocida is the causative agent of pneumonic pasteurellosis in swine, which is commonly associated with the final stages of enzootic pneumonia or porcine respiratory disease complex. Although this syndrome is one of the most common and important diseases of pigs, data on antimicrobial susceptibility of P. multocida isolates are uncommon in Brazil. Therefore, the present study was carried out to determine and to compare antimicrobial susceptibility profile of Brazilian P. multocida isolated from pigs with lesions of pneumonia or pleuritis during two-time periods. Historical isolates (period of 1981 to 1997; n=44) and recent isolates (period of 2011 to 2012; n=50) were used to determine the MIC of amoxicillin, enrofloxacin, florfenicol and tetracycline by microbroth dilution. Florfenicol had the lowest level of resistance for both historical and recent isolates (0% and 6%, respectively), while tetracycline had the highest (20.5% and 34%, respectively). Multi-drug resistance (MDR) to amoxicillin/florfenicol/tetracycline was observed in 6% of recent isolates. There was a significant increase (p˂0.05) in resistance for amoxicillin and enrofloxacin in recent isolates compared with historic isolates (3.8% and 18%, respectively), most likely due to the selective pressure of antimicrobial usage to treat and prevent P. multocida infections. The results of this study showed an increase of isolates resistant to important drugs used in treatment of P. multocida infections in pigs, demonstrating the need for the implementation of rational use of antimicrobials in Brazilian swine industry.(AU)

Pasteurella (P.) multocida é o agente da pasteurelose pneumônica em suínos, a qual é comumente associada com o estágio final da pneumonia enzoótica suína ou complexo das doenças respiratórias dos suínos. Apesar de ser uma das doenças mais comuns e importantes na suinocultura, dados sobre suscetibilidade antimicrobiana de isolados de P. multocida são raros no Brasil. Dessa forma, o presente estudo foi realizado para determinar e comparar o perfil de suscetibilidade de isolados de P. multocida de suínos com lesões de pneumonia ou pleurite no Brasil durante dois períodos. Isolados históricos (período de 1981 a 1997; n=44) e contemporâneos (período de 2011 a 2012; n=50) foram usados para determinar a concentração inibitória mínima (CIM) de amoxicilina, enrofloxacina, florfenicol e tetraciclina através do teste de microdiluição em caldo. Florfenicol apresentou o menor nível de resistência para ambos os isolados históricos e contemporâneos (0% e 6%, respectivamente), enquanto que tetraciclina apresentou o maior nível de resistência (20.5% e 34%, respectivamente). Resistência a múltiplos antimicrobianos (amoxicilina, florfenicol e tetraciclina) foi observada em 6% dos isolados recentes. Foi observado aumento significativo (p˂0.05) na resistência a amoxicilina e enrofloxacina em isolados recentes comparado com isolados históricos (3.8% e 18%, respectivamente), provavelmente devido à pressão de seleção de antimicrobianos usados no tratamento e prevenção de infecções causadas por P. multocida. Os resultados deste trabalho demostraram o aumento de isolados resistentes a importantes drogas utilizadas no tratamento de infecções causadas por P. multocida em suínos, evidenciando a necessidade da implementação do uso racional de antimicrobianos na suinocultura brasileira.(AU)

Comparación y evaluación de métodos cuantitativos para determinar la susceptibilidad antimicrobiana de cepas del complejo Mycobacterium abscessus / Comparison and Evaluation of Quantitative Methods for Determining Antimicrobial Susceptibility of Complex Mycobacterium Abscessus Strains / Comparação e avaliação de métodos quantitativos para determinar a susceptibilidade antimicrobiana de cepas do complexo Mycobacterium abscessos

Resumen Introducción: el complejo Mycobacterium abscessus incluye especies patógenas emergentes multirresistentes, lo cual limita las opciones terapéuticas para tratar las infecciones causadas por dichos microorganismos. En este estudio se compararon las concentraciones inhibitorias mínimas (CIM) obtenidas mediante dos métodos cuantitativos, se establecieron los puntos de corte empleados en el micrométodo colorimétrico (MMC) y se evaluó la susceptibilidad antimicrobiana. Materiales y métodos: la CIM de nueve antibióticos fue determinada mediante el MMC y la microdilución en caldo (MDC) para 19 cepas del complejo M. abscessus. El test F de Snedecor se utilizó para establecer la diferencia significativa de las CIM entre los dos métodos y se determinaron los puntos de corte mediante la técnica de distribución de la probabilidad para el MMC. Resultados: se encontró una correlación de los resultados de la CIM del 50% entre MMC y MDC para los antibióticos ensayados. Probablemente esta discrepancia en los resultados se deba a diferencias en algunos parámetros técnicos de cada procedimiento. Todas las cepas fueron sensibles a la amikacina y resistentes a meropenem y ampicilina-sulbactam. Independientemente de la especie del complejo M. abscessus, las fluoroquinolonas mostraron una baja actividad inhibitoria (0-25%) sobre los aislados clínicos, resultados que son similares a los reportados por otros autores. Conclusión: Los patrones de multirresistencia observados en las cepas analizadas sugieren la necesidad de utilizar las pruebas de susceptibilidad como herramientas que permitan orientar y optimizar las conductas terapéuticas en infecciones producidas por M. abscessus.

Abstract Introduction: The Mycobacterium abscessus complex includes multidrug resistant emerging pathogens, which limit therapeutic options for treating infections caused by these microorganisms. In this study, the minimum inhibitory concentrations (MICS) obtained by 2 quantitative methods were compared, the cut-off points used in the colorimetric micromethod (CMM) were established and the antimicrobial susceptibility was evaluated. Materials and Methods: The MIC for nine antibiotics was determined by CMM and broth microdilution (BMD) for 19 strains of M. abscessus complex. The Snedecor F test was used to establish the significant difference in the CIM between the methods, cutoff points were determined by the probability distribution method for the CMM. Discussion: A correlation of 50% between CMM and BMD for antibiotics tested was found. Probably, this discrepancy in the results is due to differences in some technical parameters of each procedure. All strains were susceptible to amikacin and were resistant to meropenem and ampicillin-sulbactam. Independently of the species of M. abscessus complex, fluoroquinolones showed a low inhibitory activity (0-25%) on clinical isolates, results that are similar to those reported by other authors. Conclussion: The Multidrug resistance patterns observed in the strains tested suggest the need for susceptibility testing as tools to guide and optimize the therapeutic behavior in infections caused by M. abscessus.

Resumo Introdução: o complexo Mycobacterium abscessus inclui espécies patógenas emergentes multirresistentes, o qual limita as opções terapêuticas para tratar as infeções causadas por estes microrganismos. Neste estudo compararam-se as concentrações inibitórias mínimas (CIMS) obtidas mediante 2 métodos quantitativos, se estabeleceram os pontos de corte empregados no micrométodo colorimétrico (MMC) e se avaliou a susceptibilidade antimicrobiana. Materiais e métodos: a CIM de 9 antibióticos foi determinada mediante o MMC e microdiluição em caldo (MDC) para 19 cepas do complexo M. abscessus. O teste F de Snedecor utilizou-se para estabelecer a diferença significativa das CIMS entre os dois métodos e determinaram-se os pontos de corte mediante a técnica de distribuição da probabilidade para o MMC. Resultados: se encontrou uma correlação dos resultados da CIM do 50% entre MMC e MDC para os antibióticos testados. Provavelmente, esta discrepância nos resultados se deve a diferenças em alguns parâmetros técnicos de cada procedimento. Todas as cepas foram sensíveis à amikacina e resistentes a meropenem e ampicilina-sulbactam. Independentemente da espécie do complexo M. abscessos, as fluoroquinolonas mostraram uma baixa atividade inibitória (0-25%) sobre os isolados clínicos, resultados que são similares aos reportados por outros autores. Conclussão: Os patrões de multirresistência observados nas cepas analisadas, sugerem a necessidade de utilizar as provas de susceptibilidade como ferramentas que permitam orientar e otimizar as condutas terapêuticas em infeções produzidas por M. abscessus.

Atividade antimicrobiana in vitro das folhas de araçá (Psidium cattleianum Sabine) contra micro-organismos da mucosa oral / In vitro antimicrobial activity of leaves of araçá (Psidium cattleianum Sabine) against oral micro-organisms

Introdução: A espécie Psidium cattleianum Sabine tem despertado o interesse dos pesquisadores por apresentar, além de atividade cicatrizante, analgésica e antioxidante, propriedades antimicrobianas frente a micro-organismos da mucosa oral que podem atuar como agentes cariogênicos. Objetivo: Foi avaliada, neste trabalho, a atividade antimicrobiana de extratos bruto e fracionados das folhas do araçá, além do seu perfil cromatográfico. Material e método: Para avaliação da atividade antimicrobiana, foi utilizada a técnica de microdiluição, para determinação da Concentração Inibitória Mínima (CIM), e repique do inóculo em Ágar Muller Hinton (Himedia), para averiguação da Concentração Bactericida Mínima (CBM). O extrato foi testado nas concentrações entre 10 e 500 µg/mL. O perfil cromatográfico foi realizado pelo método de Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE). Resultado: Os resultados obtidos foram submetidos a uma análise descritiva e foi possível observar a atividade inibitória dos extratos do P. cattleianum contra S. mutans e S. oralis. Conclusão: A atividade antimicrobiana dos extratos de P. cattleianum contra micro-organismos orais justifica maiores estudos para a utilização medicinal dessa espécie, como, por exemplo, sua utilização em enxaguantes bucais.

Introduction: The specie Psidium cattleianum Sabine has aroused the interest of researchers to exhibit, healing activity, analgesic, antioxidant, antimicrobial properties against the micro-organisms of the oral mucosa that can act as cariogenic agents. Objective: It was analyzed in this study the antimicrobial activity of crude extracts and fractions and chromatographic profile of araçá. Material and method: For antimicrobial activity, we used the technique of on broth microdilution for determining the Minimum Inhibitory Concentration (MIC) and replating of inoculum in Muller Hinton (Himedia) agar for finding the Minimum Bactericidal Concentration (MBC). The extract was tested at concentrations between 10 and 500 µg/mL. The chromatographic profile was performed by the method of High Performance Liquid Chromatography. Result: The results were submitted to a descriptive analysis was possible to observe the inhibitory activity of the extracts of P. cattleianum against S. oralis and S. mutans. Conclusion: The antimicrobial activity of P. cattleianum extracts against oral microorganisms justifies the use of this species as a medicinal plant.

Antimicrobial and antioxidant activity of essential oil and different plant extracts of Psidium cattleianum Sabine / Atividade antimicrobiana e antioxidante do óleo essencial e diferentes extratos vegetais de Psidium cattleianum Sabine

Abstract The goals of the study were to determinethe antimicrobial and antioxidant activities of essential oil and plant extracts aqueous and ethanolic of Psidium cattleianum Sabine; the chemical composition of the essential oil of P. cattleianum; and the phytochemical screening of aqueous and ethanolic extracts of the same plant. Regarding the antimicrobial activity, the ethanolic extract exhibited moderate antimicrobial activity with respect to bacteria K. pneumoniae and S. epidermidis, whereas, regarding other microorganisms, it showed activity considered weak. The aqueous extract and the essential oil showed activity considered weak, although they inhibited the growth of microorganisms. About the antioxidant potential, the ethanolic and aqueous extracts exhibited a scavenging index exceeding 90%, while the essential oil didn´t show significant antioxidant activity. Regarding the phytochemical composition, the largest class of volatile compounds identified in the essential oil of P. cattleianum included the following terpenic hydrocarbons: α-copaene (22%); eucalyptol (15%), δ-cadinene (9.63%) and α-selinene (6.5%). The phytochemical screening of extracts showed the presence of tannins, flavonoids, and triterpenoids for aqueous and ethanolic extracts. The extracts and essential oils inhibit the growth of microrganisms and plant extracts showed significant antioxidant activity. Also, the phytochemical characterization of the essential oil showed the presence of compounds interest commercial, as well as extracts showed the presence of important classes and compounds with biological activities.

Resumo Os objetivos do trabalho foram determinar as atividades antimicrobiana e antioxidante do óleo essencial e dos extratos vegetais aquoso e etanólico de Psidium cattleianum Sabine; a composição química do óleo essencial P. cattleianum e a triagem fitoquímica dos extratos vegetais aquoso e etanólico da mesma planta. Quanto à atividade antimicrobiana, o extrato etanólico apresentou atividade antimicrobiana moderada frente as bactérias K. pneumonieae e S. epidermidis, enquanto frente aos demais micro-organismos apresentou atividade considerada fraca. O extrato aquoso e o óleo essencial apresentaram atividade considerada fraca, embora tenham inibido o crescimento dos micro-organismos. Em relação ao potencial antioxidante, os extratos etanólico e aquoso apresentaram índice de sequestro superior a 90%, enquanto o óleo essencial não apresentou atividade antioxidante significativa. Para a composição fitoquímica, a maior classe de compostos voláteis identificados no óleo essencial de P. cattleianum foram os hidrocarbonetos terpênicos, sendo eles: α-copaeno (22%), eucaliptol (15%), δ-cadineno (9,63%) e α-selineno (6,5%). Na triagem fitoquímica dos extratos verificou-se a presença de taninos, flavonóides e triterpenóides tanto para o extrato aquoso quanto etanólico. Os extratos e óleo essencial inibiram o crescimento dos micro-organismos e os extratos vegetais apresentaram atividade antioxidante significativa. Também, a caracterização fitoquímica do óleo essencial mostrou a presença de compostos de interesse comercial, assim como os extratos apresentaram a presença de classes e compostos com importantes atividades biológicas.

Susceptibility of dermatophytic fungi to commonly used disinfectants / Suscetibilidade de fungos dermatófitos a desinfetantes comumente utilizados

This study aimed evaluate the antidermatophytic activity of three commercial disinfectants commonly used for environmental control of microorganisms in veterinary medicine. Sodium hypochlorite at 40 µL/mL, chloro-phenol derived at 30 µL/mL and chlorhexidine digluconate at 66.7 µL/mL were tested against 14 strains of dermatophytes, identified as Microsporum canis (n: 3) and Microsporum gypseum (n: 11). The tests was performed in accordance with guidelines of the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), documents M38-A2 and M51-A, adapted to disinfectants. In the microdilution broth test, chlorhexidine digluconate had MIC values (Minimum Inhibitory Concentration) of 4.16 µL/mL and MCF (Minimum Fungicidal Concentration) from 4.16 to 8.33 µL/mL, while chloro-phenol derived obtained MIC and MCF of 1.87 µL/mL, and both disinfectants had fungicidal activity at concentrations below the recommended. Sodium hypochlorite obtained MIC from 10 to 80 µL/mL and MFC of 40 to 80 µL/mL, requiring at most isolates twice the recommended concentration to achieve same activity. In the disc diffusion test, the mean inhibition zones for chlorhexidine digluconate was 10.53 mm, for chloro-phenol of 9.9 mm and for sodium hypochlorite was 6.2 mm. Chlorhexidine digluconate and chloro-phenol presented a significant reduction in the growth of dermatophytes, while sodium hypochlorite in concentration recommended showed a low antifungal activity against tested isolates.

O objetivo do estudo foi avaliar a atividade antidermatofítica de três desinfetantes comerciais frequentemente utilizados no controle ambiental de micro-organismos em medicina veterinária. Hipoclorito de sódio a 40 µL/mL, derivado de clorofenol a 30 µL/mL e digluconato de clorexidine a 66.7 µL/mL foram testados contra 14 cepas de dermatófitos, identificados como Microsporum canis (n: 3) e Microsporum gypseum (n: 11). Foram utilizadas as diretrizes do Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), documentos M38-A2 e M51-A, com adaptações para desinfetantes. Na microdiluição em caldo, digluconato de clorexidine apresentou valores de CIM (Concentração Inibitória Mínima) de 4.16 µL/mL e CFM (Concentração Fungicida Mínima) entre 4.16 a 8.33 µL/mL; derivado de clorofenol obteve CIM e CFM de 1.87 µL/mL, demonstrando que ambos os desinfetantes apresentaram atividade fungicida em concentrações inferiores às recomendadas. O hipoclorito de sódio demonstrou CIM entre 10 a 80 µL/mL e CFM de 40 a 80 µL/mL, requerendo duas vezes a concentração recomendada pelo fabricante para obter atividade fungicida frente a maioria dos isolados fúngicos testados. No teste de disco-difusão, a média das zonas de inibição do digluconato de clorexidine foi de 10.53 mm; do derivado clorofenol 9.9 mm e do hipoclorito de sódio 6.2 mm. O digluconato de clorexidine e o derivado cloro-fenol apresentaram redução significante no crescimento dos dermatófitos testados, enquanto o hipoclorito de sódio, na concentração recomendada, demonstrou baixa atividade antifúngica contra os dermatófitos testados.

Comparação de métodos para avaliação da atividade antimicrobiana e determinação da concentração inibitória mínima (cim) de extratos vegetais aquosos e etanólicos / Comparison of methods for evaluation of antimicrobial activity and determination of minimum inhibitory concentration (mic) of aqueous and ethanol plant extracts

Vários estudos estão sendo conduzidos para a descoberta de novos agentes antimicrobianos provenientes de plantas, para que possam ser utilizados em produtos farmacêuticos, cosméticos e na indústria alimentícia. A ausência de padronização de métodos utilizados para a avaliação de extratos vegetais com potencial antimicrobiano dificulta a comparação de resultados. Considerando a necessidade de estabelecer um método com resultados consistentes para avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos vegetais, este trabalho propôs-se a avaliar a atividade antimicrobiana e determinar a concentração mínima inibitória de extratos de plantas da família Myrtaceae sobre diferentes micro-organismos, utilizando três métodos para avaliação de antimicrobianos. Os métodos empregados foram microdiluição em caldo e difusão em ágar por disco e poço. Foram avaliados os extratos de Psidium guajava, Myrciaria cauliflora e Syzygium cumini sobre bactérias Gram-positivas, negativas e levedura. Em geral, a inibição promovida pelos extratos no teste de difusão em ágar por poço foi maior do que os valores obtidos por disco, independentemente do extrato vegetal testado. Contudo, a atividade inibitória de todos os micro-organismos só pôde ser determinada com o método de microdiluição em caldo, que também apresentou os resultados mais reprodutíveis, e mostrou-se o mais econômico e confiável para se avaliar a atividade antimicrobiana de extratos vegetais quando comparado aos outros métodos.(AU)

Several studies have been conducted to discover new antimicrobial agents from plants to be used in pharmaceuticals, cosmetics and in the food industry. The lack of standardized methods for the evaluation of plant extracts with antimicrobial potential complicates the comparison of results. Taking into consideration the need to establish a method with consistent results to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts, this study aimed to evaluate the antimicrobial activity of extracts of some plants from the Myrtaceae family on different micro-organisms based on a comparative assay with three methods that are commonly used for the assess antimicrobials. The methods used were broth microdilution, and agar diffusion by disc and well. The evaluated extracts were those of Psidium guajava, Myrciaria cauliflora, and Syzygium cumini for Gram-positive and negative bacteria and yeast. In general, inhibition extracts promoted by the agar diffusion test by well was higher than the values ​​obtained by disc, regardless of the plant extracts tested. However, the inhibitory activity of all micro-organisms was only possible to be determined with the microdilution broth method, which also presented the more reproducible results, and proved to be the most economic and reliable way to evaluate the antimicrobial activity of plant extracts in contrast with other methods.(AU)

ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE MÉIS PRODUZIDOS POR MELIPONÍNEOS NATIVOS DO PARANÁ (BRASIL) / ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF HONEYS PROVIDED BY MELIPONINES FROM PARANÁ (BRAZIL)

O objetivo deste trabalho foi estudar a atividade antibacteriana e antifúngica de méis in natura, elaborados por abelhas nativas sem ferrão e de extratos fenólicos (EFM) obtidos a partir dessas amostras. A atividade antimicrobiana de 21 amostras de mel, coletadas no Estado do Paraná (Brasil), foi avaliada pelo método de microdiluição em caldo, determinando-se a concentração inibitória mínima (MIC) contra as cepas de Escherichia coli ATCC 10530, Staphylococcus aureus ATCC 25923 e Candida albicans ATCC 10231. As amostras de mel apresentaram maior atividade antimicrobiana para as bactérias E. coli (MIC90 ≥3,12%) e S. aureus (MIC90 ≥1,56%) em comparação aos valores obtidos para a levedura C. albicans (MIC90 ≥12,5%). Os EFM revelaram menor atividade antimicrobiana em relação aos méis in natura, pois apenas nove amostras de EFM inibiram o crescimento de S. aureus em10 mg.mL­1. Tais resultados permitem inferir que o mel de abelhas sem ferrão constitui alimento com propriedades funcionais e que apresenta potencial terapêutico contra infecções.

Suscetibilidade a antifúngicos in vitro de Candida spp. em pacientes do Hospital Universitário Regional de Maringá-PR / Antifungal susceptibility of Candida spp. in vitro among patients from Regional University Hospital of Maringá-PR

INTRODUÇÃO: No ambiente hospitalar, são frequentes as infecções por leveduras do gênero Candida spp., o que torna esse assunto um importante alvo de estudos. OBJETIVO: Avaliar o perfil de suscetibilidade aos antifúngicos de espécies de Candida de pacientes internados no Hospital Universitário Regional de Maringá-PR (HURM). MATERIAL E MÉTODOS: As amostras foram submetidas ao teste de microdiluição em caldo (MD), segundo o documento M27-A3 para determinação da concentração inibitória mínima (CIM), e ao teste de difusão em disco de acordo com o documento M44-A2, ambos do Clinical Laboratory Standarts Institute (CLSI). RESULTADOS E DISCUSSÃO: Foram obtidos 91 isolados provenientes de amostras de urina, hemocultura, ponta de cateter, secreção orotraqueal, entre outros, sendo 38 Candida albicans, 23 C. tropicalis, 16 C. gabrata, 10 C. parapsilosis e quatro C. krusei. Dos antifúngicos testados, anfotericina B, voriconazol e anidulafungina foram os mais eficazes. CONCLUSÃO: A comparação entre as metodologias de microdiluição em caldo e disco difusão (DD) mostrou boa correlação para fluconazol para a maioria das espécies de Candida spp., sendo possível destacar que a DD é útil para triagem dos principais antifúngicos usados na prática clínica. No entanto, casos de resistência detectados por DD devem ser confirmados por meio do método de MD, evitando, assim, resultados falsos resistentes, melhorando a eficácia e a segurança do tratamento.

INTRODUCTION: Due to the ubiquity of nosocomial yeast infections of the genus Candida spp., studies in this area have become increasingly relevant. OBJECTIVE: To evaluate the antifungal Candida spp. susceptibility profile of hospitalized patients from the Regional University Hospital of Maringá-PR (HURM). MATERIAL AND METHODS: The samples were submitted to broth microdilution test (MD) according to protocol M27-A3 in order to determine the minimum inhibitory concentration (MIC) and disk diffusion test according to protocol M44-A2, both from Clinical Laboratory Standards Institute (CLSI). RESULTS AND DISCUSSION: We obtained 91 isolates from urine samples, blood culture, catheter tip, endotracheal secretions, among others, from which 38 were Candida albicans, 23 were C. tropicalis, 16 were C. gabrata, 10 were C. parapsilosis, and four were C. krusei. Among the tested antifungal medications, amphotericin B, voriconazole and anidulafungin proved to be the most effective. CONCLUSION: In the comparison between broth microdilution and disk diffusion (DD) methods, fluconazole showed good correlation for most Candida spp., which corroborates the usefulness of DD in the screening of main antifungal agents used in clinical practice. Nonetheless, cases of resistance detected by DD need to be confirmed by MD method, which avoids false-resistant results and maximizes the treatment efficacy and reliability.

Comparação entre microdiluição e disco difusão para o teste de susceptibilidade aos antifúngicos contra Candida spp / Comparison of microdilution broth and disk diffusion for antifungal susceptibility testing against Candida spp

A evolução da resistência fúngica pode ser avaliada pelo teste de susceptibilidade aos antifúngicos. Os protocolos mais utilizados para testes de susceptibilidade são a micro diluição em caldo (MDC), disco difusão (DD) e E-test. O objetivo principal deste estudo foi comparar os testes de sensibilidade realizados pelos métodos de MDC e DD para a anfotericina B e o fluconazol contra cepas de Candida spp. isoladas em Fortaleza/CE. Foram utilizadas 40 C. albicans, 50 C. tropicalis e 47 C. parapsilosis, isoladas de amostras de sangue e urina de pacientes atendidos no Hospital Geral de Fortaleza. Os testes foram realizados pelos métodos MDC e DD, de acordo com os protocolos M27-A3 e M44-A2 do CLSI. As metodologias foram comparadas e calculadas os percentuais de concordância. Para a anfotericina B e fluconazol, ocorreu um predomínio de cepas com susceptibilidade. O percentual de concordância para as metodologias foi acima de 97% e não foram detectados erros graves. A utilização de DD para realização de testes de susceptibilidade antifúngica pode ser aplicada na rotina laboratorial, pois é uma técnica fácil, barata, e de confiança quando comparada ao teste de MDC, sem comprometer os resultados para as cepas de C. albicans, C. tropicalis e C. parapsilosis.

The evolution of fungal resistance can be evaluated by testing susceptibility to antifungal agents. The protocols for susceptibility testing most common are Broth Microdilution (BMD), Disk Diffusion (DD) and E-test. The objective of this study was to compare the susceptibility tests conducted by the BMD and DD methods for amphotericin B and fluconazole against Candida spp. isolated in Fortaleza/CE. Were used 40 C. albicans, 50 C. tropicalis and 47 C. parapsilosis isolated from blood and urine samples of patients treated at Fortaleza General Hospital. The tests were conducted by the BMD and DD methods according to protocols M27-A3 and M44-A2 of the CLSI. These methods were compared and the percentages of agreement were calculated. For amphotericin B and fluconazole was a predominance of strains with reduced susceptibility. The percentage of agreement for the methods tested was above 97%. No serious errors were detected. The use of DD for performing antifungal susceptibility testing can be applied in routine laboratory tests, since one technique is easy, inexpensive, and reliable when compared to the BMD without compromising the results for the strains of C. albicans, C. tropicalis and C. parapsilosis.

Stenotrophomonas maltophilia: resistência emergente ao SMX-TMP em isolados brasileiros: uma realidade / Stenotrophomonas maltophilia: emerging resistance to TMP-SMX in Brazilian isolate: a reality

INTRODUÇÃO: Stenotrophomonas maltophilia é um importante patógeno hospitalar emergente, naturalmente resistente aos carbapenêmicos, que possui sulfametoxazol/trimetoprima (SMX-TMP) como opção terapêutica. Porém, relatos de resistência a essa droga começaram a aparecer. OBJETIVO: Avaliar o perfil de sensibilidade das cepas de S. maltophilia e comparar os resultados obtidos por diferentes metodologias. MÉTODOS: As cepas isoladas na rotina microbiológica do Hospital das Clínicas de São Paulo em 2007 foram avaliadas quanto ao perfil de suscetibilidade por disco-difusão e microdiluição. Respeitando a padronização do Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), SMX-TMP e levofloxacino foram testados pelas duas técnicas, bem como a tigeciclina, interpretada segundo a agência norte-americana Food and Drug Administration (FDA). Ticarcilina/clavulanato, ceftazidima, imipenem, meropenem e moxifloxacino foram avaliados apenas por microdiluição. O percentual de correlação entre as metodologias foi analisado pelo programa WHONET®. RESULTADOS: Das 126 cepas, 1,6 por cento apresentaram resistência a SMX-TMP; 2,4 por cento, a levofloxacino; 23 por cento, a ticarcilina/clavulanato; 54 por cento, a ceftazidima. Todas apresentaram concentração inibitória mínima (CIM) < 2 µg/mL para tigeciclina e 96,8 por cento, CIM < 2 µg/mL para moxifloxacino. O índice de concordância categórica entre as metodologias foi de 100 por cento para SMX-TMP e de 89,6 por cento para levofloxacino. DISCUSSÃO E CONCLUSÃO: Embora SMX-TMP seja a droga de escolha para o tratamento de infecções por S. maltophilia, há possibilidade de resistência a esse antibiótico, dificultando a decisão terapêutica empírica, sendo fundamental a realização do teste de sensibilidade. A técnica de disco-difusão demonstrou boa correlação com a microdiluição. Entre as novas opções terapêuticas, tigeciclina e moxifloxacino apresentaram boa atividade in vitro.

INTRODUCTION: Stenotrophomonas maltophilia is an important emerging nosocomial pathogen naturally resistant to carbapenems. Although trimethoprim/sulfamethoxazole (TMP-SMX) is commonly used as a treatment option, resistance to this drug has been recently reported. OBJECTIVE: To evaluate the susceptibility profile of S. maltophilia strains and compare the results obtained by different methods. METHODS: As to susceptibility profile, all strains, which had been routinely isolated at Hospital das Clínicas, São Paulo, in 2007, were evaluated through disk diffusion and microdilution. In accordance with the Clinical and Laboratory Standard Institute (CLSI), TMP-SMX and levofloxacin were tested through both techniques, as well as tigecycline, which was interpreted in conformity with Food and Drug Administration (FDA) regulations. Ticarcillin/clavulanate, ceftazidime, imipenem, meropenem and moxifloxacin were evaluated only through microdilution. The correlation between these methods was assessed by WHONET®. RESULTS: 1.6 percent of 126 strains were resistant to TMP-SMX, 2.4 percent to levofloxacin, 23 percent to ticarcillin/clavulanate, and 54 percent to ceftazidime. All strains showed minimum inhibitory concentration (MIC) < 2 µg/mL for tigecycline and 96.8 percent MIC < 2 µg/mL for moxifloxacin. The correlation index between both methods was 100 percent for TMP-SMX and 89.6 percent for levofloxacin, respectively. DISCUSSION AND CONCLUSION: Although TMP-SMX is the standard treatment for S. maltophilia infections, there may be resistance to this antibiotic, which hinders the therapeutic approach, hence the significance of susceptibility tests. The disk diffusion technique showed a good correlation with microdilution. Among the new therapeutic options, both tigecycline and moxifloxacin presented significant activity in vitro.

Comparison of in vitro activity of five antifungal agents against dermatophytes, using the agar dilution and broth microdilution methods / Comparação da atividade in vitro de cinco agentes antifúngicos para dermatófitos, usando os métodos de diluição em ágar e microdiluição em caldo

The purpose of this study was to compare the agar dilution and broth microdilution methods for determining the minimum inhibitory concentration (MIC) of fluconazole, itraconazole, ketoconazole, griseofulvin and terbinafine for 60 dermatophyte samples belonging to the species Trichophyton rubrum, Trichophyton mentagrophytes and Microsporum canis. The percentage agreement between the two methods, for all the isolates with < 2 dilutions that were tested was 91.6 percent for ketoconazole and griseofulvin, 88.3 percent for itraconazole, 81.6 percent for terbinafine and 73.3 percent for fluconazole. One hundred percent agreement was obtained for Trichophyton mentagrophytes isolates evaluated with ketoconazole and griseofulvin. Thus, until a reference method for testing the in vitro susceptibility of dermatophytes is standardized, the similarity of the results between the two methods means that the agar dilution method may be useful for susceptibility testing on these filamentous fungi.

O propósito do presente trabalho foi comparar os métodos de diluição em ágar e diluição em caldo para a determinação de concentração inibitória mínima de fluconazol, itraconazol, cetoconazol, griseofulvina e terbinafina para 60 amostras de dermatófitos pertencentes às espécies, Trichophyton rubrum, Trichophyton. mentagrophytes e Microsporum canis. A porcentagem de acordo entre os dois métodos para todos os isolados testados considerando-se valores < 2 diluições, foram de 91,6 por cento para cetoconazol e para griseofulvina, de 88,3 por cento para itraconazol, de 81,6 por cento para terbinafina e de 73,3 por cento para fluconazol. Uma concordância de 100 por cento foi obtido para isolados de Trichophyton mentagrophytes avaliados com cetoconazol e griseofulvina. Desta forma, até que um método de referência seja padronizado para testar a suscetibilidade in vitro para os dermatófitos, os resultados semelhantes encontrados para os dois métodos fazem com que o método de diluição em ágar possa ser útil no teste de suscetibilidade para estes fungos filamentosos.

Antimicrobial screening of some medicinal plants from Mato Grosso Cerrado / Triagem antimicrobiana de algumas plantas medicinais do Cerrado de Mato Grosso

Os extratos em hexano, diclorometano, acetato de etila e etanol das entrecascas de Bowdichia virgilioides, Calophyllum brasiliense, Cariniana rubra, Lafoensia pacari e Stryphnodendron obovatum, do rizoma de Simaba ferruginea e do látex de Croton urucurana foram triados contra um painel de bactérias e fungos usando o método de microdiluição em caldo. O látex de Croton urucurana foi o material derivado de planta com maior atividade antimicrobiana. Os extratos em acetato de etila e hexano da entrecasca de Calophyllum brasiliense destacaram-se por suas seletivas atividades antibacterianas. Os extratos polares da entrecasca de Lafoensia pacari notabilizaram-se por suas potentes e seletivas atividades contra leveduras e os extratos polares e não-polares de Bowdichia virgilioides por suas atividades antifúngicas contra hialo-hifomicetos e dermatófitos. Este é o primeiro relato mostrando atividades antifúngicas para os extratos de Cariniana rubra e Simaba ferruginea. Esse trabalho demonstrou a atividade antimicrobiana de plantas medicinais do Cerrado de Mato Grosso em ensaios in vitro e indica que elas podem ser potenciais candidatas para o desenvolvimento de novas estratégias no tratamento de infecções bacterianas e fúngicas.

Hexane, dichloromethane, ethyl acetate and ethanol extracts from stem barks of Bowdichia virgilioides, Calophyllum brasiliense, Cariniana rubra, Lafoensia pacari, and Stryphnodendron obovatum and rhizome of Simaba ferruginea and Dragon's blood red sap from Croton urucurana were screened against a panel of bacteria and fungi using the micro-broth dilution method. Dragon's blood from Croton urucurana was the most effective antimicrobial plant material. Ethyl acetate and hexane extracts of Calophyllum brasiliense stem bark deserved distinction by their selective antibacterial activity. Lafoensia pacari stem bark polar extracts distinguished by their potent and selective anti-yeast activity and Bowdichia virgilioides polar and non-polar extracts by their antifungal activity towards hyalohypho-mycetes and dermatophytes. This is the first report showing antifungal activity for polar extracts of Cariniana rubra and Simaba ferruginea. This study has demonstrated antimicrobial activity of Mato Grosso Cerrado ethnomedicinal plants in in vitro assays and has indicated that they can be effective potential candidates for the development of new strategies to treat fungal and bacterial infections.

Comparison of the broth microdilution technique and ETEST to ketoconazole front Malassezia Pachydermatis / Comparação da técnica de microdiluição em caldo e ETEST para o cetoconazol frente à Malassezia pachydermatis

Malassezia pachydermatis is recognized as a normal inhabitant and an opportunistic pathogen of the external ear canal and skin of dogs and cats. In special clinical conditions, and mainly in the cases of therapeutic failure related to external otitis and dermatitis complicated by this yeast, is recommended testing susceptibility to antifungal drugs. Different approaches of evaluating the susceptibility of yeasts faced to antifungals in laboratory exist, some of them are commercial approaches and others previously standardized by the CLSI (NCCLS,2002). The purpose of this study was to evaluate the susceptibility of 17 samples of M. pachydermatis from canine external otitis using two different in vitro antifungal susceptibility methods: the Etest®and the broth Microdilution Method (MD) with ketoconazole. The mean MIC observed between the 17 samples were 0.103mg/mL to ETEST and 0.0012mg/mL to MD ranging from 0.004 to 0.75mg/mL in ETEST and 0.0019 and 0.03mg/mL in MD using the same samples. By ETEST, two (11.8%) samples were resistant, eight(47.1%) susceptible and seven (41.1%) showed intermediate susceptibility. Through the MD it was observed four (23.5%) resistant samples, seven (41.2%) susceptible and six (35.3%) samples with intermediate susceptibility. Despite of the percentages being equivalent in each rank of susceptibility through the two techniques, the results do not correspond to the same sample. These results showed that there is an urgent need to standardize those values considered as parameters for growth inhibition of this yeast. Then a simple and efficient method could be used routinely in the laboratory practice.

Malassezia pachydermatis é reconhecida como um habitante normal e patógeno oportunista do meato acústico externo e da pele de cães e gatos. Em condições clínicas especiais e em casos de falha terapêutica relatada em otite externa e dermatite complicada por esta levedura, é recomendado o teste de suscetibilidade antifúngica. Existem diferentes métodos de avaliação da suscetibilidade da levedura frente a antifúngicos em laboratório, alguns métodos comerciais e outros previamente padronizados pelo CLSI (NCCLS, 2002). O objetivo deste estudo foi o de avaliar a suscetibilidade de 17 amostras de M.pachydermatis proveniente de otite externa canina por meio de duas técnicas in vitro de antifungigramas: o Etest® e a microdiluição em caldo (MC) com o cetoconazol. A media da Concentração Inibitória Mínima (CIM) observada entre as 17 amostras foram 0.103mg/mL para o ETEST e 0.0012mg/mL para a MC variando de 0.004 a0.75mg/mL no ETEST e entre 0.0019 e 0.03mg/mL na MC usando as mesmas amostras. Pelo ETEST, duas (11.8%) amostras foram resistentes, oito (47.1%) sensíveis e sete (41.1%) mostraram sensibilidade intermediária. Na MC foram observadas quatro (23.5%)amostras resistentes, sete (41.2%) sensíveis e seis (35.3%) amostras com sensibilidade intermediária. Apesar das porcentagens de sensibilidade serem semelhantes pelas duas técnicas, os resultados de CIM não correspondem na uma mesma amostra. Estes resultados mostraram que há uma urgente necessidade de padronização dos valores considerados como parâmetros para inibição do crescimento da levedura. Portanto, um método simples e eficiente deveria ser usado rotina na prática de laboratório.

Métodos para avaliação da atividade antimicrobiana e determinação da Concentração Mínima Inibitória (CMI) de plantas medicinais / Methods for evaluation of the antimicrobial activity and determination of Minimum Inhibitory Concentration (MIC) of plant extracts

Várias pesquisas vêm sendo desenvolvidas e direcionadas no descobrimento de novos agentes antimicrobianos provenientes de extratos de plantas e outros produtos naturais, para serem aplicados em produtos farmacêuticos e cosméticos. Atualmente, existem vários métodos para avaliar a atividade antibacteriana e antifúngica dos extratos vegetais. Os mais conhecidos incluem método de difusão em ágar, método de macrodiluição e microdiluição. A proposta dessa revisão é apresentar diferentes métodos comumente utilizados na pesquisa de novos agentes antimicrobianos, provenientes de extratos vegetais, e elucidar os principais fatores interferentes. Dessa maneira, contribuir como fonte de pesquisa para o desenvolvimento de futuros trabalhos relacionado ao estudo de atividade antimicrobiana de produtos naturais.

Several researches have been developed to search for new antimicrobial agents from extracts of plants and other natural products to be used in pharmaceutical and cosmetic products. Nowadays there are many methods to evaluate the antibacterial and antifungal activity of the plant extracts. The most known assays have been based on diffusion in agar; and micro and macrodilution methods. The purpose of this review is to describe the different methods commonly used for the determination of new antimicrobial agents from the plants extracts and elucidate the main interference factors. Moreover, this contributes as research source for future development of investigations related to the study of antimicrobial activity from natural products.

Avaliaçäo da técnica de microdiluiçäo em placa para determinaçäo de concentraçäo inibitória mínima da isoniazida em cepas de Mycobacterium tuberculosis / Evaluation of the use of microtitre plate technique to determine the minimal inhibitory concentration of isoniazid in Mycobacterium tuberculosis strains

A técnica de microdiluiçäo em placa, para determinaçäo da concentraçäo inibitória mínima, foi comparada com as técnicas de macrodiluiçäo em tubo radiométrica. A padronizaçäo da microtécnica visou sua utlizaçäo em ensaios de drogas alternativas e novos compostos com potencial açäo antimicrobiana contra o Mycobacterium tuberculosis. A droga utilizada, foi testada na cepa padräo H37Ra e em 34 cepas de teste, sendo 26 sensíveis a isoniazida e oito resistentes, segundo perfil de sensibilidade determinado pelo método da taxa de resistência. A comparaçäo entre os métodos em placa e o radiométrico resultou na concordância de 32 cepas de discordância de três. Estes dados indicam que o método de microdiluiçäo em placa é adequado para se testar o efeito de drogas ou compostos químicos sobre o M. tuberculosis. A técnica é econômica, de fácil execuçäo e näo requer equipamento para sua execuçäo. (AU)

The microtitre plate method used to determine the minimal inhibitory concentration has beencompared with the method of tube macrodilution and the radiometric method, for the purpose of evaluatingthis method in testing second-line drugs and new compounds which may have a potential effect againstMycobacterium tuberculosis. The drug used was isoniazid and 34 strains were tested, besides the standardstrain H37Ra. Out of those strains, 26 were sensitive to isoniazid and eight were resistant to it. The resultsobtained showed that the plate method gave 32 concordant results and three discordant ones. There wasa good correlation between the results of these methods and the results of the radiometric method. Thesensitivity and specificity of this method were good, being very similar to the ones for the radiometricmethod. The conclusion is that the microdilution plate method is appropriate to test the effect of drugs or compounds against M.tuberculosis. It is an inexpensive technique that is easy to perform and does notrequire any equipment in its use. (AU)